液相色譜常用相關(guān)公式
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色譜法的創(chuàng)始人是俄國(guó)的植物學(xué)家茨維特（ M.Tswett）。1906年，俄國(guó)植物學(xué)家茨維特發(fā)表了他的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：為了分離植物色素，他將含有植物色素的石油醚提取液倒入裝有碳酸鈣粉末的玻璃管中，并用石油醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸鈣顆粒表面的吸附力不同，隨著淋洗的進(jìn)行，不同色素向下移動(dòng)的速度不同，從而形成一圈圈不同顏色的色帶，使各色素成分得到了分離。他將這種分離方法命名為色譜法(chromatography)。
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植物葉色素分離實(shí)驗(yàn)
色譜分析法（Chromatography）
色譜分析法簡(jiǎn)稱(chēng)色譜法或?qū)游龇ǎ且环N物理或物理化學(xué)分離分析方法，該法利用某一特定的色譜系統(tǒng)進(jìn)行混合物中各組分的分離分析，主要用于分析多組分樣品。
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色譜圖
檢測(cè)色譜分離后組分的響應(yīng)信號(hào)對(duì)時(shí)間作圖得到的曲線(xiàn)稱(chēng)為色譜圖
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基線(xiàn)：在一定色譜條件下，僅有流動(dòng)相通過(guò)檢測(cè)器系統(tǒng)時(shí)所產(chǎn)生的信號(hào)的曲線(xiàn)，稱(chēng)為基線(xiàn)，如圖中ot線(xiàn)。實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定時(shí)，基線(xiàn)是一條平行于橫軸的線(xiàn)；基線(xiàn)反映儀器（主要是檢測(cè)器）的噪聲隨時(shí)間的變化。
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? 峰高：色譜峰頂點(diǎn)與基線(xiàn)之間的垂直距離，以h表示，如圖AB’線(xiàn)。
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?區(qū)域?qū)挾龋荷V峰的區(qū)域?qū)挾戎苯优c分離效率有關(guān)。描述色譜峰寬的方法有三種：標(biāo)準(zhǔn)偏差σ、峰寬W、半峰寬W1/2。
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?標(biāo)準(zhǔn)偏差（σ）：σ為正態(tài)分布曲線(xiàn)上兩拐點(diǎn)間距離之半，σ值的大小表示組分離開(kāi)色譜柱的分散程度。σ值越大，流出的組分越分散，分離效果變差；反之，流出組分集中，分離效果好。
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? 峰寬W：通過(guò)色譜峰兩側(cè)的拐點(diǎn)作切線(xiàn)，在基線(xiàn)上的截距稱(chēng)為峰寬，或稱(chēng)基線(xiàn)寬度，也可用W表示，如圖IJ 的距離。根據(jù)正態(tài)分布的原理 ，可證得峰寬和標(biāo)準(zhǔn)差的關(guān)系是W=4σ。
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? 半峰寬W1/2：峰高一半處的峰寬稱(chēng)為半峰寬，如圖 GH 的距離。W1/2=2.355σ，W=1.699W1/2。
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W1/2、W都是由σ派生而來(lái)的，除用它們衡量柱效外，還用于計(jì)算峰面積。半峰寬測(cè)量較方便，最為常用。
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保留值
是用來(lái)描述樣品組分在色譜柱中保留程度的參數(shù)，并作為色譜定性的指標(biāo)。其表示方法有：
保留時(shí)間
死時(shí)間
調(diào)整保留時(shí)間
死體積
調(diào)整保留體積
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相對(duì)保留值
又稱(chēng)分離因子、分配系數(shù)比或相對(duì)容量因子，即在一定色譜條件下，被測(cè)組分的調(diào)整保留時(shí)間（體積）與標(biāo)準(zhǔn)物的調(diào)整保留時(shí)間（體積）之比。
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采用相對(duì)保留值是為了消除某些操作條件，如流速和固定液流失等，對(duì)保留值的影響。相對(duì)保留值中標(biāo)準(zhǔn)物可以是被測(cè)樣品中的某一組分，也可以是人為加入的某一化合物。
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保留指數(shù)
I為待測(cè)物質(zhì)i在某固定液X上的保留指數(shù)，選取兩個(gè)正構(gòu)烷烴作為基準(zhǔn)物質(zhì)，其中一個(gè)的碳數(shù)為N，另一個(gè)為N+n，它們的調(diào)整保留時(shí)間分別為t’R(N)和 t’R(N+n)，使待測(cè)物質(zhì)i的調(diào)整保留時(shí)間t’R(i)恰好于兩者之間，即t’R(N)<t’R(i)<t’R(N+n)。將含物質(zhì)i和所選的兩個(gè)正構(gòu)烷烴的混合物注入其固定液X的色譜柱，在一定溫度條件下繪制色譜圖。
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保留指數(shù)的計(jì)算式為：
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當(dāng)相鄰兩個(gè)正構(gòu)烷的碳數(shù)差值n=1時(shí)，保留指數(shù)或簡(jiǎn)化為：
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容量因子與分配系數(shù)
1.容量因子（k）
在平衡狀態(tài)下，組分在固定相(s)與流動(dòng)相(m)中的質(zhì)量之比，稱(chēng)為容量因子。公式如下：
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2.分配系數(shù)（K）
在平衡狀態(tài)下，組分在固定相(s)與流動(dòng)相(m)中的濃度之比，稱(chēng)為分配系數(shù)。公式如下：
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保留值與容量因子及分配系數(shù)的關(guān)系
色譜分離是基于固定相對(duì)試樣中各組分的吸附或溶解能力強(qiáng)弱的不同，而這種吸附或溶解能力的強(qiáng)弱可定量地用分配系數(shù)K（或容量因子k）值的大小來(lái)表示。吸附或溶解能力強(qiáng)的組分分配系數(shù)（或容量因子）大，保留時(shí)間長(zhǎng)；反之，吸附或溶解能力弱的組分分配系數(shù)小，保留時(shí)間短。
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發(fā)布于: 2024-07-11